植物赖氨酸含量的测定（茚三酮显色法）-赖氨酸含量的测定(2)

(2)茚三酮试剂:称取1g茚三酮和1g氯化镉(CdCl2.H20),加入25 mL上述缓冲溶液和75mL乙二醇,室温下放置--天,第二天使用。若出现沉淀,则过滤后使用。该溶液一定 要头一天配制,第二天使用,不宜放置过久，也不能现用现配。
(3)4%和2%无水碳酸钠溶液各50mL。
(4)标准亮氨酸溶液.准确称取25mg亮氨酸,加数滴稀盐酸,待溶解后定容至50mL,该溶液亮氨酸浓度为500:g/mL。
准确吸取上述母液1mL、3mL、5mL、7mL、9mL,分别稀释至25mL,待用。
三、实验步骤
(一)绘制标准曲线
准确吸取已配好的标准浓度系列的亮氨酸溶液各0.5mL,分别放人5支试管中,每种浓度做三个重复。再取一支试管加入0.5 mL蒸馏水做空白对照。向每支试管中各加人0.5mL的4%碳酸钠溶液和2mL茚三酮试剂(头一天配好的),混匀,在80C恒温水浴上保温30min。取出后，立即放人冷水浴中冷却3min,然后向每管内加人5mL的95%乙醇,摇匀,在分光光度计上500nm波长处进行比色,以空白做对照,读取吸光度。以吸光度值为纵坐标，亮氨酸浓度为横坐标,绘出标准曲线,并求出曲线的斜率。
(二)样品的测定
准确称取已脱脂的各种玉米种子干粉各25 mL,每个品种做三个重复。放人试管中(试管应预先烘千),加人约300 mg细石英砂(估计数字)和1 mL 2%碳酸钠溶液,用圆头玻棒充分搅拌2 min,注意切勿将试管挤破。将试管放人80心恒温水浴中,提取10min,应常搅动。取出试管,向每管内按顺序加入2nL茚三酮试剂,混匀,放人80C恒温水浴中,保温显色30min,同时以蒸馏水做一空白对照,取出后，立即放人冷水浴中冷却3min,以下步骤与标准曲线做法相同。加完乙醇后进行过滤，用滤液进行比色,读取吸光度。若样品颜色过深，则可取一-定量的滤液用95%乙醇稀释后比色,吸光度的数值以在标准曲线范围内为宜。
在标准曲线上查出相当的亮氨酸含量。一-般作物的籽粒中,蛋白质含量约为干重的10% ~ 20%,富含蛋白的种子中则为30% ~ 50%。赖氨酸含量约为3~7g/16g氮。
四、结果计算-植物赖氨酸含量的测定（茚三酮显色法）-赖氨酸含量的测定
按下列公式进行计算: