Blood(IF22.1)｜组学大牛MatthiasMann利用DIA蛋白组发现……(2)

步骤2：AE阳性/阴性白血病患者CD34 细胞蛋白组学验证差异蛋白变化情况；
步骤3：检测AML-1及转录因子与差异蛋白启动子区域的结合；
步骤4：检测差异蛋白对细胞功能的影响。
研究结果
1. 磷脂酶C信号在AML1-ETO LSCs中富集
首先，研究人员用表达AE或MLL-AF9的原代小鼠白血病干细胞进行了DIA蛋白质组学分析，共定量到3000多个蛋白，差异蛋白868个，功能分析发现磷脂酶C（PLC）通路和钙依赖性细胞信号通路显著上调。这一结果在原发性患者CD34 样本的蛋白组学分析中得到进一步证实。与文献已报道数据进行整合分析，发现在PLC家族中，只有PLCG1表达量在AE-AML中显著升高，而且PLCG1在复发患者中表达量也是显著升高。

图1 PLC和Ca2 信号在AML1-ETO转化的LSCs中富集
2. PLCG1是AML1-ETO的靶点
为了阐明AE-AML中PLCG1的高表达是否由AML1-ETO诱导，研究人员分析了AE-阳性SKNO1细胞、非AE细胞系(K562)和正常人CD34 细胞的AML1-染色质免疫共沉淀数据，发现只在AE-阳性SKNO1细胞的PLCG1启动子区域检测到与AML1特异性结合。AML1-ETO与不同的转录因子协同维持白血病细胞中PLGC1的高水平表达。研究人员进一步用多西环素(Dox)诱导的AML1-ETO人胚胎干细胞分化模型进行研究，发现PLCG1的表达与Dox同步且呈现Dox剂量依赖性。