「罗工流式宝典第1式」小鼠Treg细胞的鉴定、分离及体外抑制实验

罗工秘籍系列自2020年发布以来，就深受小伙伴们的欢迎。而自本周起，罗工又有新系列和大家见面了：罗工宝典，其中都是精心整理的完整实验操作方案，希望此系列可以对大家的科研有所裨益。
调节性T（Treg）细胞是CD4 T细胞的一个亚群，它表达Foxp3作为转录因子。Treg细胞通过调节免疫反应，在免疫耐受和维持体内平衡中发挥着重要作用。Treg细胞的主要作用是抑制效应T（Teff）细胞的增殖和细胞因子如IFN-γ、TNF-α和IL-2的产生。研究表明，Treg细胞抑制Teff细胞功能的能力会在持续的病原体感染和癌症发展过程中增强。在参与T细胞抑制的因素中，表达程序性细胞死亡蛋白-1（PD-1）的终末耗竭性T（Texh）细胞和Treg细胞被广泛认为是抗原持久性和抑制环境的标志。Treg细胞表达PD-1的水平与其抑制T细胞增殖的抑制能力强弱相关。

图1. Treg细胞在癌症中的作用
实验前准备
步骤1
步骤2
步骤3
1. RPMI培养基、FBS、双抗、L-谷氨酰胺、2-巯基乙醇
2. FACS 缓冲液
3. 红细胞裂解液
4. 70μm滤器
5. 固定破膜试剂盒
6. 相关鉴定指标抗体、死活染料
1. 磁珠分选缓冲液
2. Miltenyi细胞分离试剂盒
3. Miltenyi分选柱
4. 40μm滤器
1. 细胞增殖试剂盒
2. anti-CD3/CD28功能抗体或磁珠
3. 检测细胞因子ELISA试剂盒
1. 脾脏样本单细胞悬液制备与Treg鉴定
1） 脾脏淋巴细胞的分离
a) 取小鼠脾脏置于2% RPMI培养基（2% FBS 1% 双抗）中。
b) 使用注射器柱塞研磨，并通过70μm细胞过滤器，用2ml 2% RPMI培养基冲洗。