利用超分子不透光生物材料对组织工程植入物的体内降解进行成像(8)

2.5.3.密度测量
在标准的非对比增强轴向图像上，在移植物外边界后的一个圆形感兴趣区域（ROI）被放置在移植物的近端、中间和远端三个水平。测量了ROI中的平均信号强度和信号强度的标准差。
2.6.组织学
2.6.1.免疫组化
外植体在4%福尔马林中固定，1%琼脂（欧金特）预包埋，然后石蜡包埋。连续4个µm切片用苏木精和伊红（HE）染色为基本形态，用小天狼星红（PSR）染色胶原蛋白的检测。使用单克隆小鼠抗cd68抗体（Serotec，MCA341GA，1：400）在柠檬酸缓冲液中提取抗原后，进行免疫组化染色检测巨噬细胞。
2.6.2.定量组织学和免疫组织学分析
两名研究人员对被调查组和解释的时间点不知情，他们独立进行了分析。切片用尼康E800显微镜和ACT-1软件进行拍照。为了测量平均壁厚和平均管腔直径，每个载玻片都在2×物镜下进行研究。在高功率放大镜下（高功率场（hpf），40×物镜下研究了细胞的数量；面积为0.034 mm2）。使用ImageJ软件手动计数每个PCL2000- U4U管（含或不含I-U4U）中4个随机hpf区域的细胞总数。
用PSR染色法和圆偏振光法定量测定胶原蛋白的含量。每个染色切片，对4个随机的hpf场进行数字化拍照，标记胶原阳性区域并进行标记和二值化。阳性面积是以占总表面的百分比来测量的。在4个随机hpf场下，对每个染色载玻片的免疫阳性细胞（CD68）进行定量分析。在4个hpf图像中测量阳性细胞的面积从二值化图像中得到的总数的百分比。然后计算每个样本的四幅高功率图像的平均值。
2.7.统计分析
数值数据以平均±标准差表示。统计学差异采用Prism或Mann-Whitney软件)。采用Kruskal-Wallis检验来测量支架密度的统计学差异。p<值为0.05，视为差异有统计学意义。采用线性回归分析来比较斜率。

三、结果和讨论

3.1.I-U4U造影剂的合成及材料表征