利用超分子不透光生物材料对组织工程植入物的体内降解进行成像(6)

简单地说，噻唑蓝四溴铵（MTT）（来自Sigma）溶解在磷酸盐缓冲盐水中，浓度为5mgmL−1，过滤并在完全培养基中进一步稀释至最终浓度为1mgmL−1。取提取液培养基，取50µL MTT/培养基。成纤维细胞在标准培养条件下孵育2小时，然后取出MTT溶液，用100µL的异丙醇（用0.04 m盐酸酸化）替换，直到所有的甲瓒晶体溶解。随后，在Tecan Safire酶标仪上在570 nm（650 nm参考波长）下测定吸光度。在研究过程中，细胞活力相对于在未经处理的培养基中保持的3T3成纤维细胞，该参考细胞被设置为100%的细胞活力。
2.4：电纺丝支架的植入和移植
2.4.1：动物
荷兰乌得勒支大学的动物护理和使用委员会批准了所有程序。24只健康雄性斯普拉格道利大鼠（300-400克），购自查尔斯河实验室，分成3组饲养，并随意喂食。环境在室温下保持24 h，光-暗周期为12-12h。大鼠分为两组，试验组（n = 12）接受PCL2000- U4U和I-U4U（碘化物含量11.4 wt%）主动脉间置移植物，对照组（n = 12）接受仅PCL2000-U4U（碘化物含量0 wt%）主动脉间置移植物。所有24个移植物都用戈尔-特克斯盾牌包裹着。移植物在第1天（=8）、第14天（=8）和第1个月后（=8）移植。
2.4.2：植入式移植物的准备
为了防止细胞跨壁和经吻合口生长，所有移植物均采用Gore-Tex保护。采用间断缝合线（10-0ethelon，静电纺管远端和近端BV-4），对其进行端到端吻合。此外，Gore-Tex被包裹在静电纺丝管上，形成了一个无法穿透的外层（图4）。
2.4.3：外科手术
动物用异氟烷气体麻醉。行中线剖腹手术，腹部脏器侧化以暴露下腔静脉和腹主动脉。主动脉与下腔静脉分离后，用微血管夹封闭肾动脉与主动脉分叉之间的腹主动脉段。主动脉横断后，支架，包括Gore-tex条，使用间断缝合进行近端和远端端端吻合（10-0 Ethilon，BV-4）。取出血管夹后，确认主动脉远处的脉动血流。所有支架均立即暴露于动脉血流动力学条件下。腹部被封闭成两层（3-0 Vicryl FS-2）。术中及术后均未使用肝素。丁丙诺啡作为术后腹腔注射镇痛药。在老鼠回到笼子之前，它们被评估为急性移植物血栓形成或后肢瘫痪的证据。