利用超分子不透光生物材料对组织工程植入物的体内降解进行成像(7)

2.4.4：终止和外植
在终止前，动物使用KXAmix麻醉，包括氯胺酮/盐酸（奈酮，100毫克毫升−1），噻嗪（塞达蒙，20 mg毫升−1）和阿托品（阿托品酸PCH，1 mg毫升−1）。大鼠腹腔注射0.2 mL/100 g KXAmix。在左颈静脉或尾静脉引入阿布卡特，以便在CT扫描时使用非离子性血池造影剂。CT扫描后（见下文），小心移植移植物。外植体在4%福尔马林固定中进行免疫组化。用于后续GPC分析的外植体用未稀释的高乐氏溶液（5.25%次氯酸钠次氯酸鈉水溶液）处理20 min，这足以去除整合组织。然后，这些外植体用磷酸盐缓冲盐水冲洗（PBS），然后晾干以作进一步分析。
2.4.5.GPC
将PCL2000-U4U参考物以及从高乐氏处理的外植体中回收的合成材料（每个样品≈0.5-1mg）溶解在含0.1%溴化锂的0.75 mL DMF中。溶液通过0.2µm注射器过滤器过滤，并在50°C的瓦里安/聚合物实验室PL-GPC 50上重复分析（两次单独注射），配备Shodex GPC KD-804柱，并使用带有0.1%溴化锂的DMF作为洗脱液。据此，测定了相对于PEG标准的平均数量（Mn）和平均重量（Mw）以及分子量分布（多分散性D = Mw/Mn）。给出了单个动物的Mw值的标准偏差（从重复的测量值中）。还给出了每个时间点的平均Mw值，包括这些平均值上的标准差。
2.5.CT扫描
2.5.1.程序
CT采集在256层CT扫描仪上进行，（iCT，飞利浦医疗保健，荷兰）。扫描范围包括了该动物的整个身体。暴露参数为120 kV管电压和500 mAs有效管电流。首先，成像时不使用动脉造影剂。随后，所有动物通过左颈静脉或尾静脉以0.2 mL−1（超静脉300mgmL−1，碘普胺，美国拜耳医疗公司）注射碘非离子造影剂。用动脉造影剂增强的图像来评估移植物的通畅程度。图像采集在延迟8或15秒后开始。图像以0.9 mm切片厚度重建0.45 mm，并转移到专用工作站。
2.5.2.体积和长度的测量值
利用非对比度增强图像，计算了使用I-U4U移植物的PCL2000-U4U的体积和长度。第一个3D体渲染图像是使用自定义图像滤波器生成的，该滤波器包含了Hounsfield单元（HU）值高于175 HU的所有体素。使用电子工具，移植物被数字化切除并测量其体积。