利用超分子不透光生物材料对组织工程植入物的体内降解进行成像(5)

2.3.3：孔隙度
我们可以准确地称重多个支架样本，并通过使用数字卡尺测量支架的外径和长度来评估这些电纺丝支架的体积。支架的内径等于心轴的大小（2.1 mm）。假设PCL2000-U4U（PCL本身的密度为1.15gmL−1）为−1，I-U4U的密度为1.53gmL散装材料的−1。I-U4U的密度估计是基于I-U4U的相对分子量（即922 Da），以及一个相应的和假设的分子有一个甲基和两个乙基，而不是三个碘化基（即615Da，即与I-U4U相似的分子体积）。最后，估计该假设分子的密度为1.02gmL−1（二环己基尿素的密度为1.02gmL−1）。给定测量到的支架的重量和体积，以及估计的材料的密度，我们可以（大致）计算出支架的孔隙率。
2.3.4：水暴露性泄漏试验
将碘化物含量为15.2 wt%的电纺丝支架样品浸泡在室温水中（5 mg样品，5 mL水中）中，长时间孵育。在几个时间点（0、2、4、8、16、36、72和170天），将材料样品干燥，用二甲基甲酰胺（DMF）作为内标（Varian 400 MHz NMR）的1 H NMR测量。样品还采用凝胶渗透色谱分析（Varian/聚合物实验室PL-GPC 50，配备Shodex GPC KD-804柱，使用含有0.1%溴化锂的DMF作为洗脱液，在50°C下操作）。实验结束时，用高效液相色谱光相二极管阵列质谱（HPLC-PDA/MS）检测上清水，该设备是岛津LC-10 AD VP系列LC，与PDA探测器（芬尼根测量员PDA Plus探测器，热电子公司）和离子阱探测器（LCQ Fleet，热科学公司）相结合。
分析在298 K下使用Alltech Alltima HP C18 3µ柱，注入体积为2µL，流速为0.2 mL min−1，水梯度为MeCN（从5%到100% MeCN，其中MeCN和水均含有0.1%甲酸）。
2.3.5.细胞毒性试验
电纺丝支架（0、11.4和15.2 wt%）加入完全培养基（Gibco DMEM，添加10 v/v%胎牛血清和1 v/v% PenStrep），温度为37°C和5%二氧化碳。样品以每体积比20 mg支架/毫升完全培养基提取24小时。将3T3小鼠成纤维细胞以每孔5×103细胞的密度接种在96孔板中，并在标准培养条件下保持24小时，直到细胞生长到50%的融合度。接下来，移除培养基，将3T3成纤维细胞在100µL过滤提取物的存在下再培养24小时。细胞暴露于含有1 v/v% Triton-X 100的完全培养基中，作为细胞毒性条件的内部对照。使用MTT细胞毒性测定法测定其细胞毒性。