蛋白质印迹法实验指南：第1部分，实验原理和样品准备(7)

五、氧化与还原条件通过WB分析的样品被变性和还原，以蛋白质在电泳过程中根据它们的分子进分解。添加还原剂，如β-巯基乙醇(BME)或二硫苏糖醇(DTT)，可减少半胱氨酸残基之间的二硫键。 SDS处通过破坏残基内和残基之间的非共价键使蛋白质变性，从而将蛋白质线性化为“松软”的氨基酸链。SDS还有效地饱和蛋白质的聚酰胺骨架，降低电荷对蛋白质迁移的影响。
六、注意事项样品的完全还原可能导致蛋白质无法按预期解析，这可能会被观察为拖尾条带或不理想大小的条带。因此，应在使用当天将新鲜的还原剂添加到加载缓冲液中。加热足也会导致样品完全变性。
七、天然或非还原凝胶非还原或天然凝胶用于观察蛋白质的天然为，例如它们的化学计或与溶液中其他蛋白质的相互作用。这些蛋白质通常通过考马斯或银染色而是免疫印迹来观察。在这种情况下，应将还原剂添加到加载缓冲液中，从加载和运缓冲液中去除SDS，并且要煮沸样品。表5根据所需的蛋白质状态详细说明了缓冲液中的成分。溴酚蓝通常也被添加到上样缓冲液中，以使凝胶电泳过程中的蛋白质迁移可视化。由于体积小，溴酚蓝比样品中的蛋白质迁移速度快。
下表比较了不同状态蛋白质和缓冲液组成：

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