一区顶刊：国家肝癌中心用多组学技术解析双阳性细胞轨迹和特征(3)

图2 | T细胞簇的构成表现出区域多样性，L区在T细胞方面表现出独特的免疫背景
3.肿瘤相关DPT细胞的表型和功能
为在 T 细胞成熟过程中，经典的 DPT 细胞是胸腺中定义明确的幼稚 T 细胞。然而，对肿瘤相关 DPT 细胞的分子特征和功能的研究很少。为了进一步探索 DPT 细胞的潜在贡献，作者根据 CD4 和 CD8 的表达模式将 T 细胞分离为 CD4 单阳性 (CD4 SPT)、CD8 单阳性 (CD8 SPT)、双阴性 (DNT) 和双阳性 (DPT) 细胞 (图 3A )。如图 3B所示，在高达 70% 的 HCC 患者 (9/13) 中发现 L 区 DPT 细胞显著增加。作者进一步探讨了 DPT 细胞中 T 细胞活化标志物和 T 细胞耗竭标志物之间的共表达模式。在 PD-1、CXCR3、CCR4 和 CD28 之间观察到强阳性共表达（图 3D）。此外，发现记忆T细胞的标志物CD45RO与PD-1呈阳性共表达。
流式细胞仪手动门控图进一步证实了这种共表达。
观察到包括CD28、CD69、CD44和ICOS在内的T细胞活化相关标志物在PD-1 CD45RO DPT细胞中上调，表明PD-1 CD45RO DPT细胞可能表现出活化表型。这种在 SPT 细胞中表达和激活的 PD-1 表型已在肺癌中报道。
然后，通过比较 SPT、DPT 和 DNT 细胞之间免疫耗竭因子的表达水平。几乎所有免疫衰竭标志物在 PD-1CD45RO DPT 细胞中均显著上调（图 3E、F）。通过体外实验，作者发现在 PMA 和离子霉素刺激后，DPT 细胞（从 L 区分离）表达更高水平的 IFN γ、 TNF α ，这证实了 DPT 细胞可能处于激活阶段（图 3G）。DPT 表达的 IL-2 水平与 CD8SPT 细胞相似，这表明它们具有激活其他 T 细胞的能力。