非编码RNA疗法，免疫原性、特异性、递送难题如何各个击破？(3)

miRNA对TLR7和TLR8的刺激依赖于富含GU的序列（例如5"-UGUGU-3"或5"-GUCCUUCAA-3"）的存在，而且会引起IFNα介导的炎症反应，激活树突状细胞和巨噬细胞中NF-κB和炎性细胞因子的生成。此外，单链RNA比双链RNA更容易引起免疫刺激，因此，目前临床使用或开发中的所有siRNA药物都是双链的（表1，2）。
现在RNA疗法中普遍使用了第二代化学修饰，来降低RNA疗法的免疫刺激可能性。例如siRNA上的2"-核糖修饰可以消除TLR刺激。第三代修饰，例如吗啉反义寡核苷酸（PMO）可以通过中和小RNA药物的电荷来进一步降低免疫原性，从而阻止它们与蛋白质的相互作用。
尽管在解决RNA疗法的免疫原性问题上取得了一些进展，但免疫原性障碍仍需更深的探索。下面是一些可能的解决方案：
1. 使用更小的反义RNA
由于TLR的有效激活需要长度至少为21个核苷酸的单链RNA，因此设计更小的RNA疗法或许可以规避疗法的免疫原性。
例如，锁核酸（LNA）是一种被7-8个核苷酸短序列修饰的miRNA抑制剂（antimiR），靶向miRNA的5"-种子区域，可以拮抗和抑制共享该种子序列的整个miRNA家族。
在小鼠癌症模型中注射微小LNA显示出了抗肿瘤作用，而且在小鼠心脏应激模型中注射靶向miR-34的微小LNA还改善了心脏参数，这些结果是抑制单个miR-34家族成员所无法实现的。
2. 应用节拍miRNA疗法
与节拍化疗类似，将节拍RNA疗法定义为在长时间内定期、多次施用有限的药物剂量，以达到虽低但有效的剂量范围，而不会引起过度的毒性或免疫原性。
对患有转移性HER2阳性乳腺癌的老年患者，在曲妥珠单抗加帕妥珠单抗的药物组合中加入节拍环磷酰胺显著延长了患者的无进展生存期。在数月内连续进行RNA疗法的给药应该也可以达到类似的结果，但是需要注意的是，为了安全地执行节拍RNA疗法，还需要进行大量的药效学和药代动力学研究。
3. RNA联合疗法
联合疗法可用于减少RNA疗法所需的剂量，从而降低免疫原性。例如与化疗、放疗、小分子疗法以及免疫疗法的联合使用。
RNA联合疗法开发中还有一个有趣的方法：开发能够同时递送多个小RNA的合成RNA分子。例如，基于tRNA-pre-miR-34a这个载体开发的组合式RNA CO-BERA可以同时递送NRF2–siRNA、anti-miR-21-5p、let-7c-5p、miR-124-3p和miR-34a-3p，这种siRNA、miRNA抑制剂和miRNA模拟物组合在体外成功抑制了多种肺癌细胞系的生长。