基于SDHB突变自发PC/PG肿瘤的大鼠模型及肿瘤细胞的建立及意义(5)

至此，PC/PG细胞系宣告构建成功，接下来要做的就是进行分子水平的验证了。

图6. 可传代细胞系的表型[3]
肿瘤和细胞系的全基因组测序（WGS）
为了进一步明确RS0和RS1/2细胞系在基因层面发生了怎样的改变，作者对两种细胞系进行了全基因组测序，并与其来源大鼠的正常组织进行了对比。
通过将SDHB外显子1及其上游一共1.4k左右的片段进行比对，发现了RS0细胞系保留了因基因编辑造成的sdhb第1外显子上的13个碱基缺失去，同时还有sdhb基因上游启动子前729bp的丢失，而且与RS0大鼠不同的是，RS0细胞系中的这两处改变都是纯合的，这可能是RS0肿瘤表型明显的原因之一。另一方面RS1/2大鼠来源的肿瘤细胞系则发生了相反的改变，其13bp的缺失恢复成了野生型。

图7. 全基因组测序分析[3]
代谢和蛋白表达炎症
为了进一步确定RS0和RS1/2两种肿瘤的特征，需要继续对RS0和RS1的代谢物进行检测。结果发现两种肿瘤细胞的琥珀酸盐都发生了严重的积累（红框）；乳糖（绿框）或谷氨酸（蓝框）的积累也和SDH相关的人源肿瘤细胞的情况非常类似。如果想用RS0进行PG研究，可以发现RS0具有SDH缺乏型PG的高多巴胺表达，极低的去甲肾上腺素和肾上腺素表达。因此在代谢方面RS0也对PC/PG进行了很好的还原。
HIF2A（Hypoxia Inducible Factor 2 Alpha, EPAS1）的通路发生改变是SDHB突变的遗传性癌症的重要特征，于是在分子方面，作者也对这条信号通路相关RNA和蛋白的表达进行了验证，RNASeq的结果表明HIF2A本身及其下游的Vegfa（Vascular endothelial growth factor A）表达都有10倍以上显著升高。