基于SDHB突变自发PC/PG肿瘤的大鼠模型及肿瘤细胞的建立及意义(4)

不过这里却留给人一个疑问，那就是为什么同是由SDHB杂合子发生了PC/PG的大鼠组织，RS0和RS1/2之间会有如此大的区别呢？尤其是理论上基因型一致的两种大鼠，为什么SDHB的表达差异如此之大。不要急，待到后面讲到全基因组测序（WGS）的时候会公布答案。

图4. 大鼠异种移植PC/PG肿瘤病理结果展示[3]
大鼠PG/PC肿瘤细胞内结构特点
刚才观察的是组织层面的表型，如果我们将视野用电镜聚焦到细胞内，那么可以看到RS0较于RS1/2神经内分泌颗粒（secretory granules，箭头所示）的分布更加弥散，细胞质液泡更大更多（v），这与SDH缺陷的人肿瘤细胞非常类似。另一方面，RS0细胞也与以前的SDH缺陷导致的胃间质瘤一样出现了线粒体细长的现象。与组织层面的结果类似，因此相较于RS1/2，RS0在很多方面都与人的SDH缺陷肿瘤组织具有更为接近的表型。

图5. 大鼠异种移植PC/PG肿瘤细胞内结构展示[3-5]
可传代PC/PG细胞系的获得
表型有了，下一步就是要将肿瘤细胞培养成能够无限传代方便保存的细胞系了。如果用常规RPMI培养液（Roswell Park Memorial Institute Medium）加入10%马血清和5%胎牛血清，并将细胞置于5%氧气培养箱中，RS0细胞的细胞质内会很快产生并聚集液泡进而造成细胞在2周左右死亡；而RS1/2细胞在同样的条件下则不会产生液泡，并可以存活数月，只不过细胞体积会随着细胞接近死亡而缓慢减小。为了让RS0细胞“升级”成细胞系，需要进一步改变培养条件，通过降低血清浓度并降低培养箱含氧量，同时在培养液中加入促干细胞因子，经过多次尝试后，终于培养得到了RS0细胞系。在无血清条件下，RS0能够脱壁悬浮生长并能聚集成细胞团。通过BRDU（检测DNA复制）染色（黑色）可以观察到聚集成团的细胞仍然处于不断增生的状态之中。